Immunohistochemia

Immunohistochemia (IHC) to potężna technika laboratoryjna stosowana do wykrywania specyficznych antygenów (białek) w komórkach wycinka tkanki. Łączy zasady immunologii i mikroskopii w celu identyfikacji i lokalizacji specyficznych białek w próbkach tkanek, co czyni ją niezbędną w wielu obszarach badań medycznych, diagnostyki i patologii. Technika ta jest szeroko stosowana w diagnostyce nowotworów, a także w celu identyfikacji pochodzenia tkankowego niektórych chorób, pomagając w zrozumieniu zachowania guza i podejmowaniu decyzji dotyczących leczenia.

Co to jest immunohistochemia?

Immunohistochemia (IHC) to technika laboratoryjna stosowana w celu wykrycia obecności specyficznych antygenów w komórkach wycinka tkanki. Wykorzystuje zasadę interakcji antygen-przeciwciało do wiązania przeciwciał z antygenami, umożliwiając uwidocznienie antygenu pod mikroskopem.

Proces IHC obejmuje użycie przeciwciał oznaczonych wykrywalnym markerem, takim jak enzym lub barwnik fluorescencyjny, w celu namierzenia i związania się ze specyficznymi antygenami w próbce tkanki. Te przeciwciała są wysoce specyficzne dla antygenu, który mają wykrywać, co sprawia, że ​​IHC jest niezwykle precyzyjną metodą identyfikacji specyficznych białek lub markerów w próbkach tkanek.

Jak działa immunohistochemia?

Podstawowe etapy immunohistochemii są następujące:

1. Przygotowanie próbki tkanki: Próbka tkanki (zwykle z biopsji) jest pobierana i utrwalana w celu zachowania jej struktury. Następnie próbka jest krojona na cienkie sekcje i umieszczana na szkiełku przedmiotowym.
2. Pobieranie antygenu: Tkankę często poddaje się działaniu ciepła lub środków chemicznych w celu wystawienia białek lub antygenów na działanie przeciwciał, ponieważ utrwalanie formaldehydem może maskować miejsca występowania antygenów.
3. Zastosowanie przeciwciał: Wycinek tkanki poddaje się inkubacji z przeciwciałem pierwotnym, które specyficznie wiąże się z antygenem docelowym.
4. Wiązanie przeciwciał wtórnych: Następnie nakładane jest przeciwciało wtórne, które wiąże się z przeciwciałem pierwotnym i jest sprzężone ze znacznikiem (np. enzymem lub barwnikiem fluorescencyjnym).
5. Wykrycie: Tkankę traktuje się substratem, który reaguje z enzymem lub markerem, powodując zmianę koloru lub fluorescencję w miejscu antygenu. Pozwala to na uwidocznienie antygenu pod mikroskopem.
6. Interpretacja: Patolodzy analizują wyniki, badając wzory barwienia. Jeśli antygen docelowy jest obecny, tkanka będzie wykazywać specyficzne barwienie, jako zmianę koloru lub fluorescencję, wskazując lokalizację i obfitość antygenu.

Dlaczego wykonuje się immunohistochemię?

Immunohistochemia jest wszechstronnym narzędziem o różnych zastosowaniach, szczególnie w dziedzinie patologii i diagnostyki. Poniżej przedstawiono niektóre z głównych powodów, dla których wykonuje się IHC:

• Diagnostyka i klasyfikacja nowotworów: IHC odgrywa kluczową rolę w diagnozie i klasyfikacji nowotworów. Komórki nowotworowe często wyrażają specyficzne markery, które mogą pomóc zidentyfikować rodzaj nowotworu i jego pochodzenie. Na przykład rak piersi można klasyfikować na podstawie ekspresji markerów, takich jak receptory estrogenowe (ER), receptory progesteronowe (PR) i HER2. IHC może zidentyfikować te markery, pomagając określić najskuteczniejsze opcje leczenia.
• Identyfikacja pochodzenia guza: IHC jest używane do określenia pochodzenia guza, gdy próbka tkanki nie jest łatwo identyfikowalna. Na przykład, jeśli rak zostanie wykryty w węźle chłonnym, IHC może pomóc w ustaleniu, czy pochodzi on z piersi, jelita grubego czy płuca, poprzez wykrywanie markerów specyficznych dla tkanki.
• Stadia zaawansowania raka i przewidywanie rokowania: IHC służy do oceny stopnia inwazji nowotworu w tkance, pomagając określić stadium nowotworu i rokowanie. Może być również stosowana do przewidywania, jak agresywny może być nowotwór na podstawie ekspresji niektórych białek.
• Choroby autoimmunologiczne i zakaźne: IHC jest również stosowane do diagnozowania chorób autoimmunologicznych, takich jak toczeń, lub do identyfikacji infekcji wywołanych przez bakterie lub wirusy. Niektóre komórki odpornościowe lub patogeny można zidentyfikować za pomocą specyficznych markerów w próbkach tkanek.
• Cele badawcze: W badaniach IHC jest używane do badania ekspresji białek w komórkach i tkankach. Może to pomóc badaczom zrozumieć, jak rozwijają się choroby i jak różne białka oddziałują na siebie w procesach chorobowych. Jest powszechnie używane w opracowywaniu leków i do oceny skuteczności interwencji terapeutycznych.

Jak przygotować się do immunohistochemii

Sama immunohistochemia nie wymaga specjalnego przygotowania pacjenta, ponieważ jest to test diagnostyczny wykonywany na próbkach tkanek. Jednak następujące kroki mogą być zaangażowane w przygotowanie do testu IHC:

• Pobieranie próbek tkanek: Test IHC wymaga próbki tkanki, zazwyczaj uzyskanej poprzez biopsję lub operację. Jeśli biopsja jest konieczna, Twój lekarz wyjaśni procedurę, która może obejmować znieczulenie miejscowe, sedację lub znieczulenie ogólne w zależności od lokalizacji i wielkości próbki tkanki.
• Historia pacjenta: Podanie swojemu lekarzowi szczegółowej historii medycznej jest ważne dla interpretacji wyników. Jeśli masz rodzinną historię konkretnych nowotworów lub chorób autoimmunologicznych, udostępnienie tych informacji pomoże patologom wybrać odpowiednie przeciwciała do testu.
• Przegląd objawów: Zanim poddasz się biopsji lub zabiegowi chirurgicznemu, który umożliwi pobranie próbki do badania IHC, lekarz może poprosić o szczegółową analizę objawów, aby pomóc w wyborze konkretnych testów i markerów do analizy.

Interpretacja wyników testów

Interpretacja wyników immunohistochemii zależy od wzoru i intensywności barwienia, które analizuje przeszkolony patolog. Kluczowe elementy, które należy wziąć pod uwagę, to:

• Intensywność barwienia:
  • Silne zabarwienie: Oznacza wysoki poziom antygenu docelowego w tkance.
  • Umiarkowane zabarwienie: Oznacza umiarkowaną obecność antygenu.
  • Słabe lub brak zabarwienia: Sugeruje, że antygen nie jest obecny lub jest obecny w niskim stężeniu.
• Miejsce barwienia:
  • Barwienie cytoplazmatyczne: Jeżeli barwnik zostanie znaleziony w cytoplazmie komórki, sugeruje to, że tam znajduje się białko docelowe.
  • Barwienie jądrowe: Jeżeli plama znajduje się w jądrze komórkowym, sugeruje to, że białko docelowe odgrywa rolę w jądrze komórkowym.
  • Barwienie błonowe: Barwienie błony komórkowej może wskazywać na aktywność receptorów lub obecność cząsteczek adhezyjnych.
• Wzór barwienia: Wzór barwienia, a także to, czy jest on rozproszony czy ogniskowy, pomagają ocenić rozmieszczenie i liczebność antygenu oraz są wykorzystywane w diagnostyce określonych rodzajów nowotworów lub chorób.
• Specyficzne markery: Różne choroby są powiązane ze specyficznymi markerami. Na przykład dodatni wynik HER2 jest kluczowy dla określenia opcji leczenia raka piersi, podczas gdy markery CD pomagają klasyfikować różne rodzaje chłoniaków.

Zakres normalny dla immunohistochemii

Ponieważ immunohistochemia jest techniką stosowaną do wykrywania specyficznych antygenów, nie ma tradycyjnego „zakresu normalnego” dla wyników testu. Zamiast tego wyniki są interpretowane na podstawie tego, czy docelowy antygen jest obecny w próbce i wzoru ekspresji. Pozytywny wynik dla specyficznego markera może sugerować obecność raka lub choroby, podczas gdy wynik negatywny może wskazywać na jego brak. Interpretacja zależy od kontekstu klinicznego i specyficznych testowanych markerów.

Zastosowania immunohistochemii

Immunohistochemia ma szerokie zastosowanie w diagnostyce medycznej, w tym:

• Diagnostyka i podtypowanie nowotworów: Badanie IHC pomaga zidentyfikować rodzaj nowotworu, ustalić jego pochodzenie i sklasyfikować jego podtyp (np. rak piersi, chłoniak).
• Identyfikacja markerów nowotworowych: Badanie to stosuje się w celu wykrycia obecności białek takich jak HER2 w przypadku raka piersi lub CD20 w przypadku niektórych typów chłoniaków.
• Diagnostyka chorób autoimmunologicznych: Badanie IHC może pomóc wykryć obecność specyficznych komórek układu odpornościowego lub przeciwciał, które świadczą o chorobach autoimmunologicznych, takich jak toczeń lub reumatoidalne zapalenie stawów.
• Diagnostyka chorób zakaźnych: Badanie IHC stosuje się w celu wykrywania zakażeń tkanek, w tym zakażeń bakteryjnych, wirusowych i pasożytniczych.
• Badania: Jest ona powszechnie wykorzystywana w badaniach naukowych do analizy ekspresji białek w tkankach i komórkach w celu zrozumienia mechanizmów chorobowych, szczególnie przy opracowywaniu leków.
• Stopień zaawansowania raka: Badanie IHC może pomóc w określeniu stadium nowotworu, zwłaszcza w przypadkach, gdy kluczowe znaczenie ma ustalenie stopnia rozprzestrzenienia się choroby.

10 najczęściej zadawanych pytań na temat immunohistochemii

1. Co to jest immunohistochemia? Immunohistochemia to technika laboratoryjna, która wykorzystuje przeciwciała do wykrywania specyficznych antygenów w przekrojach tkanek. Jest stosowana do diagnozowania chorób, szczególnie nowotworów, i identyfikacji obecności specyficznych białek w komórkach.
2. Jak wykonuje się immunohistochemię? Próbki tkanek są pobierane, zazwyczaj poprzez biopsję. Następnie próbka jest traktowana przeciwciałami specyficznymi dla testowanych białek. Jeśli antygen jest obecny, wiąże się z przeciwciałem i wytwarza sygnał wizualny, który jest analizowany pod mikroskopem.
3. Jakie choroby można diagnozować za pomocą immunohistochemii? Immunohistochemia jest stosowana do diagnozowania nowotworów (takich jak rak piersi, płuc lub chłoniak), chorób autoimmunologicznych i infekcji. Pomaga określić obecność i rodzaj antygenów, które mogą wskazywać na chorobę.
4. Jaką rolę odgrywa immunohistochemia w diagnostyce nowotworów? Badanie IHC pomaga zidentyfikować markery nowotworowe, takie jak HER2, receptory estrogenowe i receptory progesteronowe, które są kluczowe dla diagnozowania typów raka, określania podtypów i ustalania odpowiedniego leczenia.
5. Czy immunohistochemia jest inwazyjna? Sama immunohistochemia nie jest inwazyjna. Wymaga jednak próbki tkanki uzyskanej w wyniku takich procedur jak biopsja lub zabieg chirurgiczny, co może wiązać się z pewnym dyskomfortem w zależności od procedury.
6. Jak długo trzeba czekać na wyniki badania immunohistochemicznego? Na wyniki badania IHC zazwyczaj trzeba czekać od kilku dni do tygodnia, zależnie od złożoności testu i konieczności dalszej analizy.
7. Co oznacza pozytywny wynik immunohistochemii? Wynik pozytywny wskazuje, że docelowy antygen został znaleziony w próbce tkanki. W diagnostyce raka może to oznaczać obecność markera nowotworowego, podczas gdy w chorobach autoimmunologicznych może to sugerować obecność określonych komórek odpornościowych.
8. Co oznacza negatywny wynik badania immunohistochemicznego? Wynik ujemny oznacza, że ​​antygen nie został wykryty w próbce tkanki. W diagnostyce raka może to sugerować, że specyficzny marker, taki jak HER2 w raku piersi, jest nieobecny.
9. Czy immunohistochemię można stosować do określania stopnia zaawansowania nowotworu? Tak, IHC pomaga w określaniu stopnia zaawansowania nowotworu poprzez identyfikację rozmiaru guza, jego rozprzestrzenienia się oraz ekspresji specyficznych markerów, które wpływają na rokowanie i decyzje dotyczące leczenia.
10. Czym immunohistochemia różni się od innych badań? W przeciwieństwie do badań genetycznych i diagnostyki molekularnej, immunohistochemia koncentruje się na ekspresji białek w próbkach tkanek, co czyni ją szczególnie użyteczną do obrazowania i diagnozowania chorób na poziomie komórkowym.

Wniosek

Immunohistochemia jest niezbędnym narzędziem diagnostycznym w nowoczesnej medycynie, dostarczającym cennych informacji na temat obecności i natury chorób, w szczególności nowotworów i chorób autoimmunologicznych. Poprzez wykrywanie określonych antygenów pomaga patologom dokładnie diagnozować schorzenia, określać stadium raka, a nawet określać najlepszy sposób leczenia. Chociaż procedura nie jest inwazyjna, pobranie próbki tkanki może wymagać starannego przygotowania i wiedzy medycznej.

Zrozumienie procesu immunohistochemii, jego zastosowań i sposobu interpretacji wyników może pomóc pacjentom i pracownikom służby zdrowia w podejmowaniu świadomych decyzji dotyczących diagnozy i leczenia. Niezależnie od tego, czy przechodzisz test IHC w celu diagnozy raka, czy w ramach badania naukowego, ta metoda jest kamieniem węgielnym diagnostyki medycznej i trwających badań.