imunohistokemija

Imunohistokemija (IHC) je moćna laboratorijska tehnika koja se koristi za otkrivanje specifičnih antigena (proteina) u stanicama dijela tkiva. Kombinira načela imunologije i mikroskopije za identifikaciju i lociranje specifičnih proteina u uzorcima tkiva, što ga čini bitnim u mnogim područjima medicinskog istraživanja, dijagnostike i patologije. Tehnika se naširoko koristi u dijagnostici raka, kao i za utvrđivanje tkivnog podrijetla određenih bolesti, pomažući u razumijevanju ponašanja tumora i usmjeravanju odluka o liječenju.

Što je imunohistokemija?

Imunohistokemija (IHC) je laboratorijska tehnika koja se koristi za otkrivanje prisutnosti specifičnih antigena u stanicama dijela tkiva. Koristi princip interakcije antigen-antitijelo za vezanje antitijela na antigene, omogućujući vizualizaciju antigena pod mikroskopom.

Proces IHC-a uključuje korištenje antitijela koja su označena detektabilnim markerom, kao što je enzim ili fluorescentna boja, za ciljanje i vezanje na specifične antigene u uzorku tkiva. Ta su antitijela visoko specifična za antigen za koji su dizajnirana da detektuju, što IHC čini nevjerojatno preciznom metodom za identifikaciju specifičnih proteina ili markera u uzorcima tkiva.

Kako radi imunohistokemija?

Osnovni koraci uključeni u imunohistokemiju su sljedeći:

1. Priprema uzorka tkiva: Uzorak tkiva (obično iz biopsije) se prikuplja i fiksira kako bi se očuvala njegova struktura. Uzorak se zatim nareže na tanke komade i stavlja na predmetno staklo.
2. Dohvaćanje antigena: Tkivo se često tretira toplinom ili kemikalijama kako bi se proteini ili antigeni izložili antitijelima, budući da fiksacija formaldehidom može maskirati mjesta antigena.
3. Primjena protutijela: Isječak tkiva se inkubira s primarnim protutijelom koje se specifično veže na ciljni antigen.
4. Sekundarno vezanje protutijela: Zatim se primjenjuje sekundarno protutijelo koje se veže na primarno protutijelo i konjugira s markerom (kao što je enzim ili fluorescentna boja).
5. Otkrivanje: Tkivo se tretira supstratom koji reagira s enzimom ili markerom, proizvodeći promjenu boje ili fluorescenciju na mjestu antigena. To omogućuje vizualizaciju antigena pod mikroskopom.
6. Tumačenje: Patolozi analiziraju rezultate ispitivanjem uzoraka bojenja. Ako je ciljni antigen prisutan, tkivo će pokazati specifično obojenje, bilo kao promjena boje ili fluorescencija, što ukazuje na lokaciju i obilje antigena.

Zašto se radi imunohistokemija?

Imunohistokemija je svestran alat s različitim primjenama, posebice u području patologije i dijagnostike. Ispod su neki od glavnih razloga zašto se provodi IHC:

• Dijagnoza i klasifikacija raka: IHC ima vitalnu ulogu u dijagnostici i klasifikaciji karcinoma. Tumorske stanice često izražavaju specifične markere koji mogu pomoći u prepoznavanju vrste raka i njegovog podrijetla. Na primjer, rak dojke može se klasificirati na temelju ekspresije markera kao što su estrogenski receptori (ER), progesteronski receptori (PR) i HER2. IHC može identificirati ove markere, pomažući u određivanju najučinkovitijih opcija liječenja.
• Identificiranje podrijetla tumora: IHC se koristi za određivanje podrijetla tumora kada uzorak tkiva nije lako identificirati. Na primjer, ako se rak otkrije u limfnom čvoru, IHC može pomoći u određivanju je li nastao iz dojke, debelog crijeva ili pluća otkrivanjem markera specifičnih za tkivo.
• Stadiranje raka i predviđanje prognoze: IHC se koristi za procjenu opsega invazije raka u tkivu, pomažući u određivanju stadija raka i prognoze. Također se može koristiti za predviđanje koliko bi rak mogao biti agresivan na temelju ekspresije određenih proteina.
• Autoimune i zarazne bolesti: IHC se također koristi za dijagnosticiranje autoimunih bolesti, kao što je lupus, ili za prepoznavanje infekcija uzrokovanih bakterijama ili virusima. Određene imunološke stanice ili patogeni mogu se identificirati pomoću specifičnih markera u uzorcima tkiva.
• Svrhe istraživanja: U istraživanju, IHC se koristi za proučavanje ekspresije proteina u stanicama i tkivima. To može pomoći istraživačima da razumiju kako se bolesti razvijaju i kako različiti proteini međusobno djeluju u procesima bolesti. Obično se koristi u razvoju lijekova i za procjenu učinkovitosti terapijskih intervencija.

Kako se pripremiti za imunohistokemiju

Imunohistokemija sama po sebi ne zahtijeva posebnu pripremu pacijenta jer se radi o dijagnostičkom testu koji se izvodi na uzorcima tkiva. Međutim, sljedeći koraci mogu biti uključeni u pripremu za IHC test:

• Prikupljanje uzoraka tkiva: IHC test zahtijeva uzorak tkiva, obično dobiven biopsijom ili operacijom. Ako je potrebna biopsija, vaš će vam liječnik objasniti postupak koji može uključivati ​​lokalnu anesteziju, sedaciju ili opću anesteziju, ovisno o mjestu i veličini uzorka tkiva.
• Povijest bolesnika: Davanje detaljne povijesti bolesti vašem liječniku važno je za tumačenje rezultata. Ako imate obiteljsku povijest određenih karcinoma ili autoimunih bolesti, dijeljenje ovih informacija pomaže patolozima da odaberu prava antitijela za test.
• Pregled simptoma: Prije podvrgavanja bilo kakvoj biopsiji ili kirurškom zahvatu koji će osigurati uzorak za IHC, vaš liječnik može zatražiti detaljan pregled vaših simptoma kako bi vodio odabir specifičnih testova i markera za analizu.

Tumačenje rezultata ispitivanja

Tumačenje rezultata imunohistokemije ovisi o obrascu i intenzitetu bojenja koje analizira obučeni patolog. Ključni elementi koje treba uzeti u obzir su:

• Intenzitet bojenja:
  • Jako bojenje: Označava visoku razinu ciljnog antigena u tkivu.
  • Umjereno bojenje: Označava umjerenu prisutnost antigena.
  • Slabo ili bez bojenja: Sugerira da antigen nije prisutan ili je prisutan u niskim razinama.
• Mjesto bojenja:
  • Bojenje citoplazme: Ako se mrlja nađe u citoplazmi stanice, to sugerira da se ciljni protein nalazi tamo.
  • Nuklearno bojenje: Ako je mrlja u jezgri, to sugerira da ciljani protein igra ulogu u jezgri stanice.
  • Membransko bojenje: Bojanje na staničnoj membrani može ukazivati ​​na aktivnost receptora ili adhezijskih molekula.
• Uzorak bojenja: Uzorak bojenja, uključujući i to je li difuzno ili žarišno, pomaže u procjeni distribucije i obilja antigena i koristi se u dijagnosticiranju specifičnih vrsta raka ili bolesti.
• Specifični markeri: Različite bolesti povezane su s određenim markerima. Na primjer, HER2 pozitivnost ključna je za određivanje mogućnosti liječenja raka dojke, dok CD markeri pomažu u klasifikaciji različitih tipova limfoma.

Normalni raspon za imunohistokemiju

Budući da je imunohistokemija tehnika koja se koristi za otkrivanje specifičnih antigena, ne postoji tradicionalni "normalni raspon" za rezultate testa. Umjesto toga, rezultati se tumače na temelju toga je li ciljni antigen prisutan u uzorku i obrasca ekspresije. Pozitivan rezultat za određeni marker može ukazivati ​​na prisutnost raka ili bolesti, dok negativan nalaz može ukazivati ​​na njegovu odsutnost. Tumačenje ovisi o kliničkom kontekstu i specifičnim markerima koji se testiraju.

Primjena imunohistokemije

Imunohistokemija ima široku primjenu u medicinskoj dijagnostici, uključujući:

• Dijagnoza raka i podtipizacija: IHC pomaže identificirati vrstu raka, odrediti njegovo podrijetlo i klasificirati njegov podtip (npr. rak dojke, limfom).
• Prepoznavanje tumorskih markera: Koristi se za otkrivanje prisutnosti proteina kao što je HER2 u raku dojke ili CD20 u određenim vrstama limfoma.
• Dijagnoza autoimune bolesti: IHC može pomoći u otkrivanju prisutnosti specifičnih imunoloških stanica ili antitijela koja ukazuju na autoimune bolesti kao što su lupus ili reumatoidni artritis.
• Dijagnoza zarazne bolesti: IHC se koristi za identifikaciju infekcija u tkivima, uključujući bakterijske, virusne ili parazitske infekcije.
• Istraživanje: Obično se koristi u istraživanjima za proučavanje ekspresije proteina u tkivima i stanicama kako bi se razumjeli mehanizmi bolesti, posebno u razvoju lijekova.
• Stadiranje raka: IHC može pomoći u određivanju stadija raka, osobito u slučajevima kada je određivanje opsega širenja bolesti kritično.

10 često postavljanih pitanja o imunohistokemiji

1. Što je imunohistokemija? Imunohistokemija je laboratorijska tehnika koja koristi antitijela za otkrivanje specifičnih antigena u dijelovima tkiva. Koristi se za dijagnosticiranje bolesti, osobito raka, i identificiranje prisutnosti specifičnih proteina u stanicama.
2. Kako se izvodi imunohistokemija? Uzorci tkiva se prikupljaju, obično biopsijom. Uzorak se zatim tretira antitijelima specifičnim za proteine ​​koji se testiraju. Ako je antigen prisutan, on se veže na antitijelo i proizvodi vizualni signal koji se analizira pod mikroskopom.
3. Koja se stanja mogu dijagnosticirati imunohistokemijom? Imunohistokemija se koristi za dijagnosticiranje karcinoma (poput raka dojke, pluća ili limfoma), autoimunih bolesti i infekcija. Pomaže u određivanju prisutnosti i vrste antigena koji mogu ukazivati ​​na bolest.
4. Koja je uloga imunohistokemije u dijagnostici raka? IHC pomaže identificirati tumorske markere kao što su HER2, estrogenski receptori i progesteronski receptori, koji su ključni za dijagnosticiranje tipova raka, podtipove i određivanje odgovarajućeg liječenja.
5. Je li imunohistokemija invazivna? Imunohistokemija sama po sebi nije invazivna. Međutim, potreban je uzorak tkiva dobiven postupcima poput biopsije ili kirurškog zahvata, što može uključivati ​​određenu nelagodu ovisno o postupku.
6. Koliko je vremena potrebno za dobivanje rezultata imunohistokemije? Za rezultate IHC-a obično je potrebno nekoliko dana do tjedan dana, ovisno o složenosti testa i potrebi za daljnjom analizom.
7. Što znači pozitivan rezultat imunohistokemije? Pozitivan rezultat znači da je ciljni antigen pronađen u uzorku tkiva. Kod dijagnoze raka to bi moglo značiti prisutnost kancerogenog markera, dok bi kod autoimunih bolesti moglo upućivati ​​na prisutnost specifičnih imunoloških stanica.
8. Što znači negativan imunohistokemijski nalaz? Negativan rezultat znači da antigen nije otkriven u uzorku tkiva. U dijagnozi raka to može značiti da nema specifičnog markera, poput HER2 kod raka dojke.
9. Može li se imunohistokemija koristiti za određivanje stadija raka? Da, IHC pomaže u utvrđivanju stadija raka utvrđivanjem opsega rasta tumora, širenja i ekspresije specifičnih markera koji utječu na prognozu i odluke o liječenju.
10. Po čemu se imunohistokemija razlikuje od drugih testova? Za razliku od genetskog testiranja ili molekularne dijagnostike, imunohistokemija se fokusira na ekspresiju proteina u uzorcima tkiva, što je čini posebno korisnom za vizualizaciju i dijagnosticiranje stanja na staničnoj razini.

Zaključak

Imunohistokemija je bitan dijagnostički alat u modernoj medicini, pružajući dragocjene uvide u prisutnost i prirodu bolesti, posebno raka i autoimunih stanja. Otkrivanjem specifičnih antigena, pomaže patolozima u točnom dijagnosticiranju stanja, stadiju raka, pa čak i određivanju najboljeg načina liječenja. Iako postupak nije invazivan, prikupljanje uzorka tkiva može zahtijevati pažljivu pripremu i medicinsku ekspertizu.

Razumijevanje imunohistokemijskog procesa, njegove upotrebe i načina tumačenja rezultata može voditi i pacijente i pružatelje zdravstvenih usluga u donošenju informiranih odluka u vezi s dijagnozom i liječenjem. Bilo da prolazite IHC test za dijagnozu raka ili kao dio istraživačke studije, ova metoda je kamen temeljac medicinske dijagnostike i istraživanja koja su u tijeku.