Імуногістохімія

Імуногістохімія (ІГХ) — потужний лабораторний метод, який використовується для виявлення специфічних антигенів (білків) у клітинах зрізу тканини. Він поєднує в собі принципи імунології та мікроскопії для ідентифікації та визначення місцезнаходження специфічних білків у зразках тканин, що робить його важливим у багатьох сферах медичних досліджень, діагностики та патології. Цей метод широко використовується в діагностиці раку, а також для виявлення тканинного походження певних захворювань, допомагаючи зрозуміти поведінку пухлини та керуючи рішеннями щодо лікування.

Що таке імуногістохімія?

Імуногістохімія (ІГХ) - це лабораторний метод, який використовується для виявлення присутності специфічних антигенів у клітинах зрізу тканини. Він використовує принцип взаємодії антиген-антитіло для зв’язування антитіл з антигенами, що дозволяє візуалізувати антиген під мікроскопом.

Процес IHC передбачає використання антитіл, помічених виявленим маркером, таким як фермент або флуоресцентний барвник, для націлювання та зв’язування зі специфічними антигенами у зразку тканини. Ці антитіла є високоспецифічними до антигену, для виявлення якого вони призначені, що робить IHC неймовірно точним методом ідентифікації специфічних білків або маркерів у зразках тканин.

Як працює імуногістохімія?

Основні етапи імуногістохімії такі:

1. Підготовка зразка тканини: Зразок тканини (як правило, з біопсії) збирають і фіксують, щоб зберегти його структуру. Потім зразок нарізають тонкими шматочками та поміщають на предметне скло.
2. Отримання антигену: Тканина часто обробляється теплом або хімічними речовинами, щоб піддати білки або антигени антитілам, оскільки фіксація формальдегідом може маскувати ділянки антигенів.
3. Застосування антитіл: Зріз тканини інкубують з первинним антитілом, яке специфічно зв’язується з цільовим антигеном.
4. Вторинне зв'язування антитіл: Потім застосовується вторинне антитіло, яке зв’язується з первинним антитілом і кон’югується з маркером (наприклад, ферментом або флуоресцентним барвником).
5. Виявлення: Тканина обробляється субстратом, який реагує з ферментом або маркером, викликаючи зміну кольору або флуоресценцію на місці антигену. Це дозволяє візуалізувати антиген під мікроскопом.
6. Інтерпретація: Патологоанатоми аналізують результати, вивчаючи шаблони фарбування. Якщо цільовий антиген присутній, тканина буде проявляти специфічне фарбування, або у вигляді зміни кольору, або флуоресценції, що вказує на розташування та кількість антигену.

Для чого проводиться імуногістохімія?

Імуногістохімія є універсальним інструментом з різними застосуваннями, зокрема в області патології та діагностики. Нижче наведено деякі з основних причин проведення ІГХ:

• Діагностика та класифікація раку: ІГХ відіграє важливу роль у діагностиці та класифікації раку. Пухлинні клітини часто експресують специфічні маркери, які можуть допомогти визначити тип раку та його походження. Наприклад, рак молочної залози можна класифікувати на основі експресії таких маркерів, як рецептори естрогену (ER), рецептори прогестерону (PR) і HER2. IHC може ідентифікувати ці маркери, допомагаючи визначити найбільш ефективні варіанти лікування.
• Визначення походження пухлини: ІГХ використовується для визначення походження пухлини, коли зразок тканини важко ідентифікувати. Наприклад, якщо рак виявлено в лімфатичному вузлі, IHC може допомогти визначити, чи походить він з молочної залози, товстої кишки чи легенів, шляхом виявлення тканиноспецифічних маркерів.
• Визначення стадії раку та прогнозування: IHC використовується для оцінки ступеня інвазії раку в тканини, допомагаючи визначити стадію раку та прогноз. Його також можна використовувати для прогнозування того, наскільки агресивним може бути рак на основі експресії певних білків.
• Аутоімунні та інфекційні захворювання: ІГХ також використовується для діагностики аутоімунних захворювань, таких як вовчак, або для виявлення інфекцій, спричинених бактеріями чи вірусами. Певні імунні клітини або патогени можна ідентифікувати за допомогою специфічних маркерів у зразках тканин.
• Цілі дослідження: У дослідженнях IHC використовується для вивчення експресії білків у клітинах і тканинах. Це може допомогти дослідникам зрозуміти, як розвиваються хвороби та як різні білки взаємодіють у хворобливих процесах. Він зазвичай використовується при розробці ліків і для оцінки ефективності терапевтичних втручань.

Як підготуватися до імуногістохімії

Імуногістохімія сама по собі не вимагає спеціальної підготовки пацієнта, оскільки це діагностичний тест, який виконується на зразках тканин. Однак наступні етапи можуть бути залучені до підготовки до IHC-тесту:

• Збір зразків тканини: Тест IHC вимагає зразка тканини, зазвичай отриманого за допомогою біопсії або хірургічного втручання. Якщо потрібна біопсія, ваш медичний працівник пояснить процедуру, яка може включати місцеву анестезію, седацію або загальну анестезію залежно від розташування та розміру зразка тканини.
• Історія пацієнта: Надання вашому постачальнику медичних послуг детальної історії хвороби є важливим для інтерпретації результатів. Якщо у вас в сімейному анамнезі були певні види раку або аутоімунні захворювання, надання цієї інформації допоможе патологам вибрати правильні антитіла для тесту.
• Огляд симптомів: Перед проведенням будь-якої біопсії або хірургічної процедури, яка дозволить отримати зразок для ІГХ, ваш лікар може попросити детально проаналізувати ваші симптоми, щоб керувати вибором конкретних тестів і маркерів для аналізу.

Інтерпретація результатів тесту

Інтерпретація результатів імуногістохімічного дослідження залежить від характеру та інтенсивності фарбування, яке аналізує кваліфікований патологоанатом. Основні елементи, які слід враховувати:

• Інтенсивність фарбування:
  • Сильне фарбування: Вказує на високий рівень цільового антигену в тканині.
  • Помірне фарбування: Вказує на помірну присутність антигену.
  • Слабке фарбування або його відсутність: Припускає, що антиген відсутній або присутній у низьких рівнях.
• Місце фарбування:
  • Фарбування цитоплазми: Якщо пляма виявляється в цитоплазмі клітини, це говорить про те, що цільовий білок знаходиться там.
  • Ядерне фарбування: Якщо пляма знаходиться в ядрі, це означає, що білок-мішень відіграє певну роль у ядрі клітини.
  • Мембранозне фарбування: Фарбування клітинної мембрани може вказувати на активність рецепторів або молекули адгезії.
• Схема фарбування: Картина фарбування, включно з тим, дифузна чи вогнищева, допомагає оцінити розподіл і кількість антигену та використовується для діагностики конкретних типів раку чи захворювань.
• Специфічні маркери: Різні захворювання пов'язані з певними маркерами. Наприклад, HER2-позитивність має вирішальне значення для визначення варіантів лікування раку молочної залози, тоді як маркери CD допомагають класифікувати різні типи лімфом.

Нормальний діапазон для імуногістохімії

Оскільки імуногістохімія є методом, який використовується для виявлення специфічних антигенів, традиційного «нормального діапазону» для результатів тесту немає. Натомість результати інтерпретуються на основі того, чи присутній цільовий антиген у зразку та характеру експресії. Позитивний результат на певний маркер може свідчити про наявність раку або захворювання, тоді як негативний результат може свідчити про його відсутність. Інтерпретація залежить від клінічного контексту та конкретних маркерів, що перевіряються.

Використання імуногістохімії

Імуногістохімія має широке застосування в медичній діагностиці, зокрема:

• Діагностика раку та підтипування: IHC допомагає визначити тип раку, визначити його походження та класифікувати його підтип (наприклад, рак молочної залози, лімфома).
• Визначення пухлинних маркерів: Він використовується для виявлення наявності білків, таких як HER2 при раку молочної залози або CD20 при певних типах лімфоми.
• Діагностика аутоімунних захворювань: IHC може допомогти виявити наявність специфічних імунних клітин або антитіл, які вказують на аутоімунні захворювання, такі як вовчак або ревматоїдний артрит.
• Діагностика інфекційних захворювань: ІГХ використовується для ідентифікації інфекцій у тканинах, включаючи бактеріальні, вірусні або паразитарні інфекції.
• Дослідження: Він зазвичай використовується в дослідженнях для вивчення експресії білка в тканинах і клітинах, щоб зрозуміти механізми захворювання, особливо при розробці ліків.
• Стадія раку: ІГХ може допомогти визначити стадію раку, особливо у випадках, коли критично важливо визначити ступінь поширення захворювання.

10 поширених запитань про імуногістохімію

1. Що таке імуногістохімія? Імуногістохімія - це лабораторний метод, який використовує антитіла для виявлення специфічних антигенів у зрізах тканин. Він використовується для діагностики захворювань, зокрема раку, і визначення присутності специфічних білків у клітинах.
2. Як проводиться імуногістохімія? Зразки тканин збирають, як правило, шляхом біопсії. Потім зразок обробляють антитілами, специфічними до досліджуваних білків. Якщо антиген присутній, він зв’язується з антитілом і створює візуальний сигнал, який аналізується під мікроскопом.
3. Які захворювання можна діагностувати за допомогою імуногістохімії? Імуногістохімія використовується для діагностики раку (наприклад, молочної залози, легенів або лімфоми), аутоімунних захворювань та інфекцій. Він допомагає визначити наявність і тип антигенів, які можуть вказувати на захворювання.
4. Яка роль імуногістохімії в діагностиці раку? IHC допомагає ідентифікувати пухлинні маркери, такі як HER2, рецептори естрогену та рецептори прогестерону, які є вирішальними для діагностики типів раку, субтипування та визначення відповідного лікування.
5. Чи є імуногістохімія інвазивною? Імуногістохімія сама по собі не є інвазивною. Однак для цього потрібен зразок тканини, отриманий за допомогою таких процедур, як біопсія або хірургічне втручання, що може викликати певний дискомфорт залежно від процедури.
6. Скільки часу потрібно для отримання результатів імуногістохімії? Результати IHC зазвичай займають від кількох днів до тижня, залежно від складності тесту та необхідності подальшого аналізу.
7. Що означає позитивний результат імуногістохімічного дослідження? Позитивний результат свідчить про те, що в зразку тканини виявлено цільовий антиген. При діагностиці раку це може означати наявність онкологічного маркера, а при аутоімунних захворюваннях — наявність специфічних імунних клітин.
8. Що означає негативний результат імуногістохімічного дослідження? Негативний результат означає, що в зразку тканини антиген не виявлено. У діагностиці раку це може свідчити про те, що специфічний маркер, наприклад HER2 при раку молочної залози, відсутній.
9. Чи можна використовувати імуногістохімію для визначення стадії раку? Так, IHC допомагає визначити стадію раку, визначаючи ступінь росту пухлини, поширення та експресію специфічних маркерів, які впливають на прогноз і рішення щодо лікування.
10. Чим імуногістохімія відрізняється від інших тестів? На відміну від генетичного тестування або молекулярної діагностики, імуногістохімія фокусується на експресії білків у зразках тканин, що робить її особливо корисною для візуалізації та діагностики станів на клітинному рівні.

Висновок

Імуногістохімія є важливим діагностичним інструментом у сучасній медицині, що дає цінну інформацію про наявність і природу захворювань, зокрема раку та аутоімунних захворювань. Виявляючи специфічні антигени, він допомагає патологам точно діагностувати захворювання, визначити стадію раку та навіть визначити найкращий курс лікування. Хоча процедура не є інвазивною, забір зразків тканин може вимагати ретельної підготовки та медичної експертизи.

Розуміння процесу імуногістохімії, його використання та способів інтерпретації результатів може допомогти як пацієнтам, так і медичним працівникам приймати обґрунтовані рішення щодо діагностики та лікування. Незалежно від того, проходите ви IHC-тест для діагностики раку чи в рамках наукового дослідження, цей метод є наріжним каменем медичної діагностики та поточних досліджень.