Molekulárna patológia

Molekulárna patológia je oblasť patológie ktorá využíva princípy, techniky a nástroje molekulárnej biológie, čo je veľmi dôležitý nástroj pre prax presnej medicíny.

indikácia

• Myeloidné novotvary
  • Akútna myeloidná leukémia.

  • Myeloproliferatívne novotvary.

  • Myelodysplastické syndrómy.

  • Myelodysplastické/myeloproliferatívne neoplazmy.

  • Myeloidné/lymfoidné novotvary s eozinofíliou a preskupením génov.

  • Mastocytóza.

• Lymfoidné novotvary
• B-lymfoblastická leukémia/lymfóm

• Chronická lymfocytová leukémia

• Novotvary plazmatických buniek

• B-bunkový lymfóm vysokého stupňa

Postupy

Použitie rôznych technológií, ako je PCR v reálnom čase, fluorescenčná in situ hybridizácia (FISH), analýza fragmentov a sekvenovanie novej generácie (NGS), pomáha presne charakterizovať genetickú abnormalitu spôsobujúcu ochorenie.

• PCR umožňuje amplifikáciu fragmentov DNA na uľahčenie detekcie. PCR sa môže použiť na hľadanie určitých zmien v géne alebo chromozóme, čo môže pomôcť nájsť a diagnostikovať genetický stav alebo ochorenie, ako je rakovina.

• PCR v reálnom čase začína s templátom DNA/RNA (extrahovaným zo vzorky pacienta) a ciele záujmu (napr. mutácia JAK2 v myeloproliferatívnych neopláziách alebo fúzne transkripty BCR-ABL v CML) sú amplifikované mnoho miliónovkrát, čo je možné detegovať v reálnom čase a hlásiť kvalitatívne (detegované/nedetegované) alebo kvantitatívne (napr. kópie/ml).

• FISH – metóda molekulárnej cytogenetiky/laboratórna technika na detekciu a lokalizáciu špecifickej sekvencie DNA na chromozóme. Vzorky sa spracujú tak, aby sa uľahčila väzba cieľovej DNA so sondou DNA značenou fluorochrómom, čo umožňuje následnú vizualizáciu fluorescenčným mikroskopom.

• Analýza fragmentov: Po amplifikácii cieľa (konvenčná PCR) sa vykonáva separácia a vizualizácia fluorescenčne značených fragmentov (DNA) na základe veľkosti (napr. nestabilita mikrosatelitov).

• NGS (sekvenovanie novej generácie) – Umožňuje simultánnu detekciu diagnosticky a prognosticky relevantných genetických zmien vo viacerých génoch, pre ktoré cielenej terapie je k dispozícii. Test začína prípravou knižnice a výsledná šablóna sa klonálne amplifikuje a obohacuje, čo sa ďalej sekvenuje. Genetické zmeny sa anotujú pomocou komerčne dostupného softvéru, ktorý ich prepája s dostupnou relevantnou terapiou, klinickými skúškami a podrobnosťami o stratifikácii rizika.

výhody

• Solídne nádory:
  • Z 10 ng vstupnej nukleovej kyseliny detekuje akčné ciele v 52 génoch. Ak sa identifikuje akčný cieľ, podáva sa cielená terapia, ktorá cieli na špecifické gény a proteíny zapojené do rastu a prežitia rakovinových buniek bez ovplyvnenia normálnych buniek. Funguje tak, že blokuje rastové signály nevyhnutné pre proliferáciu rakovinových buniek, urýchľuje ich deštrukciu a tiež znižuje tvorbu nových krvných ciev potrebných pre ich prežitie. Táto terapia predĺži prežitie pacienta a zlepší celkový výsledok liečby.
  • Pomáha pri diagnostike sarkómov mäkkých tkanív, ako aj malých okrúhlych bunkových nádorov detekciou charakteristickej cytogenetickej abnormality.
• Myeloidné novotvary:
  • Súčasne deteguje všetky relevantné genetické abnormality v 79 génoch v jednom teste, a nie postupne. Tento test je veľmi užitočný na diagnostiku myeloidných neoplázií a ich klasifikáciu podľa odporúčaní. Poskytuje prognostické informácie o tom, či pacient bude potrebovať štandardnú liečbu alebo vysokodávkovú chemoterapiu, alebo transplantácia kostnej drene pre trvalé vyliečenie. Pomáha to tiež pri výbere pacientov na cielenú liečbu.
• Lymfoidné novotvary:
  • Pomáha pri stratifikácii rizika a usmerňuje liečbu.